品牌：lifeglobal 图7 global® DMSO 胚泡玻璃化冷冻套装 ·2瓶1ml 平衡液，包含DMSO、乙二醇和10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES缓冲液。 ·2瓶1ml 玻璃化冷冻液，包含DMSO、乙二醇、蔗糖和10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES缓冲液。 ·4个SunIVF embryo GPS® 操作皿，产品经过无菌、内毒素和MEA检测。 global® DMSO 胚泡玻璃化冷冻规程 使用说明 1.玻璃化冷冻操作应该在室温（20-27°C）下进行。使用前把平衡液和玻璃化冷冻液放置在室温下。以下操作步骤不要使用显微加热台。在标本在平衡液和玻璃化冷冻液中时尽量减少标本见光。 2.用液氮填充液氮贮存器到足够的深度，深度必须能淹没Cryocane上的冻存管（杯），将液氮贮存器放置于显微镜边附近。将冻存管（杯）固定于Cryocane的底端并淹没在液氮中，为玻璃化冷冻标本做准备。 3.确定需要做玻璃化冷冻的胚胎。总是选择最好质量的胚泡用于玻璃化冷冻。 4.在将要使用的培养皿和运输/存储设备上标注必要的信息。 5.在使用前，轻轻正反摇动几次以确保每瓶的平衡液和玻璃化冷冻液充分混匀。 6.在无菌条件下，用移液管注入20μl平衡液到GPS® 胚胎操作皿中，见图1。 7.从培养箱中取出带有胚泡的培养皿并检查胚胎的质量。 8.小心地转移胚泡（一次不得超过两个）到平衡液滴顶部并开始计时，尽量减少带出的培养液（或保存液）。胚泡需要在自由降落过程中在平衡液中平衡5~15分钟。胚泡会缩小然后逐渐重新扩张到原来的大小，这表明平衡过程完成。 9.当胚泡在平衡液中平衡时，分别取4滴20μl玻璃化冷冻液到GPS® 胚胎操作皿中(VS1, VS2, VS3, VS4) 。 注意：以下步骤（10-15）必须在90~110秒以内完成。 10.在平衡液中的平衡过程完成以后，吸取少许玻璃化冷冻液进入移液管并且转移胚泡到第一滴玻璃化冷冻液滴(VS1)的中央，并且握持5秒钟。 11.从VS1中快速转移胚泡到第二滴玻璃化冷冻液滴(VS2)的中央，并且握持5秒钟。 12.从VS2中快速转移胚泡到第三滴玻璃化冷冻液滴(VS3)的中央，并且握持10秒钟。 13.最后，从VS3中快速转移胚泡到第四滴玻璃化冷冻液滴(VS4)的底部。 14.关于玻璃化冷冻的步骤，需遵照玻璃化冷冻载体的说明。小心地将胚泡从VS4中转移到玻璃化冷冻载体中，然后进行冷冻载体说明规定的操作。 15.提示：从把胚泡放置到VS1到浸入到液氮中的总时间不应该超过已经确定的此步骤的最优化时间，当然也不应该超过100秒钟。 16.存储到液氮中：（执行所有这些步骤是，都必须确保玻璃化的样品充分浸在液氮中，以防止不可逆的解冻）。转移玻璃化的样品进入已经标写好的并且固定在Cryocane上的冻存管（杯）上，用另一个冻存管（杯）倒置扣在其顶部当作盖子用，然后把Cryocane转移到液氮罐中。 17.如果需要玻璃化冷冻更多的胚泡，重复上述4~16步骤，需要使用新的GPS® 胚胎操作皿以及新鲜的平衡液和玻璃化冷冻液。 global® DMSO 胚泡冷冻套装溶液用于人胚泡玻璃化冷冻的操作步骤图示，请查看说明。 图8 插图说明 ES = 平衡液 VS1 = 第一滴玻璃化冷冻液 VS2 = 第二滴玻璃化冷冻液 VS3 = 第三滴玻璃化冷冻液 VS4 =第四滴玻璃化冷冻液 T = 放置于液滴顶端 C =放置于液滴中央 B =放置于液滴底部 时间指示是指胚泡在每液滴中的时间 产品名称 global® DMSO 胚泡玻璃化冷冻套装 订购号DMVT-002 产品名称global® DMSO 胚泡玻璃化冷冻套装（基于S3） 订购号GBVI-003